RESUMO: A contaminação do ambiente hospitalar veterinário com patógenos multirresistentes coloca em perigo não apenas os animais hospitalizados, mas também a segurança no local de trabalho de veterinários e enfermeiros, responsáveis por animais e, quando se tratar de um hospital de ensino, estudantes de veterinária. O objetivo deste estudo foi mapear os principais pontos de contaminação bacteriana de um hospital veterinário de ensino no Brasil, identificando microorganismos multirresistentes e seus genes de resistência antimicrobiana. As amostras foram coletadas em 39 locais diferentes de um hospital de escola veterinária, que compreendia um pool de acordo com o ambiente de cada hospital. Em certos ambientes, mais de um pool foi coletado. Todas as amostras foram coletadas em quadruplicados para o isolamento seletivo dos principais microorganismos multirresistentes: Staphylococcus resistente à meticilina (MRS), Enterococcus resistente à vancomicina (VRE), bactérias Gram-negativas produtoras de cefalosporinases e/ou beta-lactamase de espectro estendido (ESBL) e produtoras de carbapenemase (PC). Após o isolamento e identificação dos isolados, foram realizadas reações de PCR multiplex para detectar os principais genes de cada microorganismo e testes de susceptibilidade a antimicrobianos com os principais antibióticos utilizados para cada grupo bacteriano de acordo com o CLSI. Dos 39 locais do VCH coletados, todos (100%) possuíam pelo menos um dos microrganismos pesquisados e 17,95% (n=7) dos locais foram capazes de isolar os quatro patógenos. Dos 94 pools coletados, foi possível isolar MRS em 81,91% (n=77), VRE em 12,77% (n=12), ESBL em 62,77% (n=59) e carbapenemases em 24,47% (n=23). Em relação ao MRS, o gene mecA foi detectado em todos os isolados. Todos os VREs isolados foram identificados como Enterococcus faecalis e apresentaram o gene vanA. Em relação às cefalosporinases e/ou ESBL, 89,83% (n=53) dos isolados apresentaram o gene blaTEM, 57,63% (n=34) o gene blaOXA-1, 37,29% (n=22) o gene blaCTX-M de algum grupo e 20,34% (n=12) o gene blaSHV. Foi possível identificar os principais microrganismos responsáveis por causar infecções nosocomiais em humanos (VRE, MRS, ESBL e CP) no ambiente hospitalar veterinário, sugerindo uma fonte de infecção para profissionais e estudantes de medicina veterinária, colocando alto risco para a saúde pública.

ABSTRACT: Contamination of the veterinary hospital environment with multiresistant pathogens endangers not only hospitalized animals, but also the workplace safety of veterinarians and nurses, animal guardians and, when in case of a teaching hospital, veterinary students. The objective of this study was to map the main points of bacterial contamination of a veterinary teaching hospital in Brazil to identify multiresistant microorganisms and their antimicrobial resistance genes. Samples were collected from 39 different locations of a veterinary school hospital which comprised a pool according to each hospital environment. In certain environments, more than one pool has been collected. All samples were collected in quadruplicates for the selective isolation of the main multiresistant microorganisms: methicillin-resistant Staphylococcus (MRS), vancomycin resistant Enterococcus (VRE), cephalosporinases and/or extended-spectrum beta-lactamase-producing Gram-negative bacteria (ESBL) and Carbapenemase-producing (CP). After isolation and identification of isolates, multiplex-PCR reactions were performed to detect the main genes for each microorganism and antimicrobial susceptibility tests with the main antibiotics used for each bacterial group according to CLSI. Of the 39 veterinary teaching hospital sites collected, all (100%) had at least one of the microorganisms surveyed, and 17.95% (n=7) of the sites were able to isolate the four pathogens. From the 94 pools collected, it was possible to isolate MRS in 81.91% (n=77), VRE in 12.77% (n=12), cephalosporinases and/or ESBL in 62.77% (n=59) and CP in 24.47%. (n=23). Regarding MRS, the mecA gene was detected in all isolates. All isolated VREs were identified as Enterococcus faecalis and presented the vanA gene. Regarding cephalosporinases and/or ESBL, 89.83% (n=53) of the isolates presented the blaTEM gene, 57.63% (n=34) the blaOXA-1 gene, 37.29% (n=22) blaCTX-M gene from some group (1, 2, 9 ou 8/25) and 20.34% (n=12) the blaSHV gene. It was possible to identify the main microorganisms responsible for causing nosocomial infections in humans (VRE, MRS, ESBL and CP) in the veterinary hospital environment, suggesting a source of infection for professionals and students of veterinary medicine, placing a high risk for public health.

Abstract Listeria monocytogenes is an opportunistic pathogen that causes listeriosis, a foodborne disease with low incidence but with high mortality rate in humans. This microorganism has been recovered from several dairy products, especially those produced with raw milk. The objective of this work was to investigate the presence of virulence genes, and also to define the antimicrobial susceptibility profile of L. monocytogenes isolates recovered from serrano artisanal cheese produced in Southern region of Brazil. Nine strains of L. monocytogenes (serotypes 1/2b and 4b) were evaluated through PCR to detect the presence of the virulence genes hly, inlA, inlC, inlJ, actA, plcB and iap, while antimicrobial susceptibility profile was determined via disk diffusion method. All strains exhibited the presence of the genes hly and plcB, whereas the other genes (iap, actA, inlA, inlC and inlJ) were only detected in eight strains. We verified that all strains were resistant to at least one antimicrobial agent and three of them showed multidrug resistance. These findings demonstrated the serrano artisanal cheese offers risks to consumers’ health and point to a need of adaptations and monitoring of manufacturing process of this food, in order to prevent the dissemination of L. monocytogenes.

Abstract In this work, we investigated the phenotypic profile of Staphylococcus spp. isolates recovered from raw milk and artisanal cheese, and their enterotoxigenic potential through the detection of classical enterotoxin genes (sea, seb, sec, sed and see). A total of 104 isolates (58 coagulase-positive Staphylococcus – CoPS; and 46 coagulase-negative Staphylococcus- CoNS) were used, of which 33 were retrieved from raw milk and 71 from artisanal cheese produced in the Serrana region of Santa Catarina. Identification of CoPS was conducted via biochemical tests. Detection of the genes sea, seb, sec, sed, and see was carried out by multiplex PCR technique. Among the 58 CoPS analyzed, 64% were identified as S. aureus, 22% as S. scheiferi coagulans, 12% as S. hyicus and as 2% S. intermedius. In the present study was noted that 40% of CoPS isolates retrieved from milk harbored seb gene, while only one from artisanal cheese was positive for gene sea. In this study all CoNS samples investigated were negative for enterotoxins genes. The enterotoxigenic potential of CoPS, is an issue of great importance for public health. For that reason, it is necessary that cheese factories strictly follow the safety processes involved in manufacturing.

RESUMO: O bovine leukemia virus (BLV) é um membro da família Retroviridae, gênero Deltaretrovirus, e o principal agente viral causador de perdas econômicas em rebanhos leiteiros. Diversos estudos têm sido feitos sobre os genótipos de BLV, e foram encontrados pelo menos sete em amostras de diferentes partes do mundo. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de amostras de BLV de bovinos leiteiros soropositivos no estado de Santa Catarina. Foram coletadas 454 amostras de sangue de bovinos de 31 propriedades, e fez-se inicialmente a sorologia por meio do teste de imunodifusão em gel de ágar. Após a sorologia, 191 amostras soropositivas foram então submetidas à extração de DNA, e em 77 amostras se realizou a reação da polimerase em cadeia (PCR), para a amplificação de um fragmento de 440 pb do gene env. Dezenove amostras foram submetidas à análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição por digestão do fragmento da PCR por cinco enzimas de restrição: BamHI, HaeIII, Tru9I, TaqI e MwoI. Os resultados obtidos na sorologia apontaram 42% de animais soropositivos (191/454) e 68% de propriedades positivas (21/31). Na PCR, 80,52% (62/77) dos animais apresentaram-se positivos. A análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição identificou cinco genótipos circulantes no estado, e a maior prevalência foi observada no genótipo X (47,4%). Este estudo permite-nos conhecer alguns dos genótipos virais presentes em bovinos leiteiros do estado de Santa Catarina, bem como identificar a existência de novas variantes e sua prevalência atual, e os resultados são úteis para futuros estudos epidemiológicos.

ABSTRACT: Bovine leukemia virus (BLV) is a member of Retroviridae family, genus Deltaretrovirus, and the main viral agent responsible for economic loses in dairy herds. Some studies have been carried out about BLV genotypes, and at least seven genotypes were found out in samples of different regions of the world. The objective of this study was to identify BLV samples from seropositive dairy cattle in Santa Catarina state, Brazil, using molecular techniques. Blood samples were collected (454) from dairy cattle from 31 different farms, and serology using agar gel immunodiffusion test (AGID) was performed. After that, 191 seropositive samples were submitted to DNA extraction, and in 77 samples the polymerase chain reaction (PCR) for amplification of a 440 bp fragment of the env gene was performed. Nineteen DNA samples were subjected to restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis by digestion of the PCR fragment by five restriction endonucleases - BamHI, HaeIII, Tru9I, TaqI, and MwoI. It was found 42% seropositive animals (191/454) and 68% positives of the farms (21/31). The PCR showed 80.5% (62/77) of animals positive. The RFLP analysis identified five different genotypes dispersed by Santa Catarina state, with the highest prevalence for genotype X (47.4%). Overall, our results identified the viral genotypes present in dairy cattle and the prevalence of new variants in representative farms from Santa Catarina state.

Suínos portadores assintomáticos são o principal fator de risco para a contaminação de carcaças durante o processamento industrial. Diferentes formas de prevenção e controle têm sido testadas no pós abate, dentre elas o uso de vapor e/ou ácidos orgânicos, que podem ser alternativas de baixo custo e alta eficiência. No presente estudo, testou-se o uso de solução de ácidos orgânicos e aplicação de vapor sob pressão, usados isoladamente ou em associação. Como poucas pesquisas trazem informações sobre o fato desses tratamentos promoverem ou não mudanças nas características físico-químicas da carne suína, o presente experimento se propôs também a avaliar as possíveis alterações físico-químicas de pernis submetidos a esses tratamentos. Porções de pernil foram contaminadas artificialmente com Salmonella Typhimurium DT 177 e, posteriormente, divididas em quatro tratamentos: imersão em solução fisiológica por 5 segundos (controle, T1); imersão em solução fisiológica acrescida de ácidos orgânicos 1000 ppm por 5 segundos (T2); aspersão de vapor sob pressão de 4 bar à temperatura de 140ºC (T3); e T3 seguido por T2 (T4). Após o tratamento, uma área de 100cm² foi amostrada por meio de swab para quantificação da Salmonella residual pela técnica do número mais provável (NMP). Foram avaliados também o aspecto, coloração, consistência e odor, antes e após cada tratamento dos pernis, bem como análises físico-químicas visando à determinação do percentual de lipídeos, proteínas, pH, umidade e voláteis, também antes e após cada tratamento. Observou-se que o uso de vapor associado à imersão em solução de ácidos orgânicos a 1000 ppm apresentou melhor eficiência na redução das contaminações superficiais (100% de frequência de redução), porém a melhor eficácia foi observada através da redução de 0,8 log base 10 do NMP na pele e 0,77 log base 10 do NMP na musculatura através do uso de solução fisiológica (T1) e solução de ácidos orgânicos (T2), respectivamente. Os resultados obtidos revelaram que os tratamentos utilizados não interferiram nos atributos físico-químicos, como aspecto, cor, odor e consistência. O tratamento de vapor associado aos ácidos orgânicos diminuiu o pH e aumentou o teor de umidade e voláteis da carne, porém não descaracterizou a qualidade físico-química da carne suína, que permaneceu dentro de seus padrões ideais, apta ao consumo humano.

Asymptomatic carrier pigs are the main risk factor for carcass contamination during the slaughter. Several post-slaughter prevention programs have been tested, such as organic acids and steam under pressure. These alternatives show low cost and high efficiency. This study tested the use of organic acid solutions and steam, in isolated tests and its associations. This experiment also evaluated the physical-chemistry features of the pork. Forty pork legs were contaminated with Salmonella Typhimurium DT 177 and subsequently divided into 4 treatments: immersion in physiological solution for 5 seconds (control, T1); immersion in physiological solution with 1000 ppm of organic acids for 5 seconds (T2); sprinkling of steam under pressure (4 bar) at 140ºC (T3); and T2 after T3 (T4). An area of 100cm² was sampled through superficial swabs for Salmonella counts by Most Probable Number method (MPN). Aspect, color, consistency, smell, and levels of fat, protein, pH, and moisture were also evaluated before and after each treatment. The use of steam associated to the immersion in organic acid solution showed better efficiency for reduction of superficial contamination (decreasing 100% of counts) but the better effectiveness was observed through the decreasing of 0.8 log of MPN at skin and 0.77 log of MPN at muscle by using the physiological solution (T1) and the organic acid solution (T2), respectively. The steam treatment associated with the organic acid solutions (T4) decreased the pH and increased moisture of pork legs, although it did not mischaracterize the quality (within required parameters for human consumption). All the other treatments did not change physical-chemistry fefatures.

A Salmonella sp. é uma das principais causas mundiais de toxinfecção alimentar. Nos últimos anos, as preocupações têm se voltado para a carne e produtos suínos tanto no aspecto de saúde pública como na sua comercialização/exportação. O presente estudo tem como objetivos: 1) verificar a prevalência de sorovares de Salmonella sp. em lingüiças tipo frescal de matéria-prima suína comercializadas em Lages (SC), bem como o seu nível de contaminação; e 2) verificar o perfil de resistência aos antimicrobianos destes isolados. Para tanto, foram coletadas 200 amostras de nove marcas, em diferentes estabelecimentos comerciais. Foram isoladas Salmonella sp. em 27% (54), sendo o sorovar Derby o mais encontrado. Apenas uma amostra apresentou uma concentração de microorganismos maior que 1,100 NMP.g-1, valor normalmente tido como necessário para causar infecção por Salmonella do grupo não-tifóide. Posteriormente, os 60 isolados foram submetidos ao teste de susceptibilidade in vitro, frente a 14 antimicrobianos. Entre esses isolados, 56,67% apresentaram resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados e o perfil de multirresistência foi encontrado em 20%. A prevalência elevada de produtos positivos para Salmonella sp. pode representar um risco ao consumidor, principalmente considerando-se o alto número de isolados resistentes encontrado neste estudo.

Salmonella sp. is one of the main causes of food poisoning. In the last years, the main focus has been on beef and swine products because of both public health concerns and commercialization/exportation. This study was conducted in order to: 1) verify the prevalence of Salmonella serovars in fresh pork sausages commercialized in Lages, state of Santa Catarina and analyze its level of contamination; and 2) determine the profile of antimicrobial resistance of Salmonella sp. isolates. For this purpose, 200 samples of nine brands were collected from different commercial stores. Salmonella sp. was isolated from 27% (54). Serovar Derby accounted for the highest percentage of isolates. Only one sausage sample had a quantity of microorganism higher than 1.100 MPN.g-1. This microorganism concentration is considered enough to cause a nontyphoidal Salmonella infection. Later, the 60 strains were tested against 14 antimicrobials. Among them, 56,67% showed resistance to at least one antimicrobial agent and 20% showed multi-resistance. The Salmonella sp. prevalence in the products may be a risk for the consumer, mainly considering the high number of antimicrobial resistant isolates found in the study.